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过表达sFRP2基因对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及其分子机制

蒙艳  白漪  霍松  
【摘要】:目的观察过表达分泌型卷曲相关蛋白2(sFRP2)对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将HUVECs分为两部分,一部分加入不同浓度LPS(0、5、10、15、20μg/mL),另一部分作为对照细胞不予特殊处理,作用12 h;采用CCK-8法检测其细胞存活指数,结果显示加入10、15、20μg/mL LPS作用12 h的HUVECs细胞存活指数明显低于对照细胞(P均0.01),选择10μg/mL LPS作用12 h作为后续实验条件。将HUVECs分为过表达组和阴性对照组,分别转染sFRP2过表达质粒及阴性对照慢病毒质粒,转染48 h后加入10μg/mL LPS作用12 h;采用实时荧光定量PCR法和Western boltting法检测sFRP2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western boltting法检测凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1表达。结果过表达组与阴性对照组sFRP2 mRNA相对表达量分别为2.69±0.13、1.04±0.21,蛋白相对表达量分别为3.89±0.18、1.05±0.24,细胞凋亡率分别为13.32%±1.98%、20.90%±1.72%,两组比较P均0.01。过表达组Cleaved Caspase-3、Bax及Wnt1、β-catenin、Cyclin D1表达均低于阴性对照组,Bcl-2表达高于阴性对照组(P均0.05)。结论过表达sFRP2可减少LPS诱导的HUVECs细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

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